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Chinese Name

中文名


D-熒光素

English Name

英文名


D-Luciferin

Alias

別名


(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazoly)-2-thiazoline-4-carboxylic acid;Firefly Luciferin


CAS NO.


2591-17-5

Formula

分子式


C11H8N203S2

M.W.

分子量


280.32

Class

分類


生化試劑


活體成像技術(optical in vivo imaging)目前主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術,生物發光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學發光的原理,將體外能穩定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內,與后期注射入體內的底物發生反應利用光學系統檢測光強度,間接反映出細胞數量的變化或細胞的定位。這項技術已被廣泛應用于多個領域,最常用的有腫瘤或疾病動物模型的建立,并可用于病毒學研究、siRNA研究、干細胞研究、蛋白質相互作用研究等。

原理:常見的熒光素酶有兩種,分別是螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renilla luciferase,編碼基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,底物被氧化發光(不同底物光的顏色和波長不同),當底物過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。
應用:
1)體外化學發光分析(in vitro);
2)活體成像實驗(in vivo); 
3)高靈敏度ATP分析;
4)活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析;
5)廣泛用于報告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛生監測分析;
步驟:
Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 體外生物發光檢測
1)用33.3 mL蒸餾水溶解1.0 g D-熒光素,配制成100 mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml)?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。
2)用組織培養基1∶200稀釋儲存液,配置工作液(終濃度150μg/mL)。
3)去除培養細胞的培養基。 
4)待圖像分析前,向細胞內添加1×熒光素工作液,然后進行圖像分析。
Protocol 2:In vivo analysis / 活體成像分析
1)用無菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-熒光素工作液(15mg/mL),0.2 um濾膜過濾除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
2)注射量取決于注射方式,具體如下:
注射方式劑量靜脈注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge針頭)按10 uL/g體重濃度,加入相應體積的15 mg/mL熒光素工作液肌肉注射(27 gauge針頭)50 uL,濃度為1–2 mg/mL熒光素工作液鼻內注射(pipette)50 uL,濃度為3 mg/mL熒光素工作液3)注射入體內5-10分鐘后,進行成像分析。
溶解:0.25%濃度溶解于甲醇,形成近乎無色至淺黃色的清夜
保存:-15°C 避光











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2. Mahller et al. Cancer Research. 2008, 68 (4). 1170-1179.
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5. Zhang et al. Cancer Research. 2007, 67. 9389-9397. 6. Baia, G. et al, Brain Pathology, 2007, 18 (2), 172-179.
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